Clonación y expresión funcional de proteÃnas bacterianas de la familia LCHR
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Resumen
ChrA es una proteÃna hidrofóbica que expulsa cromato de forma dependiente del potencial de membrana. Homólogos de ChrA, presentes en organismos de los tres dominios de la vida, se han agrupado en la superfamilia CHR de transportadores de cromato. Las proteÃnas CHR se dividen en las familias LCHR y SCHR. Las proteÃnas LCHR bacterianas, a su vez, se agruparon en seis subfamilias (LCHR1-LCHR6). Las β-proteobacteriasBurkholderiaxenovorans y Burkholderiavietnamiensisposeen de manera conjunta nueve proteÃnas LCHR, de cuatro subfamilias distintas. Además de las proteÃnas ChrA ya caracterizadas, ubicadas en las subfamilias LCHR2 y LCHR5, no existe evidencia de que otros miembros de las subfamilias LCHR sean funcionales. El objetivo del presente trabajo es determinar si las proteÃnas LCHR de B. xenovoransy B. vietnamiensis confieren resistencia a cromato. Se eligió un gen de cada subfamilia LCHR, se amplificaron por PCR a partir de DNA genómico y se clonaron en los vectores de expresión pUCP20 y pACYC184. Con los plásmidos recombinantes se transformó a cepas de Escherichiacoli y dePseudomonasaeruginosa y se realizaron pruebas de susceptibilidad a cromato a las transformantes, tanto en medio rico como en medio mÃnimo. Todos los genes analizados confirieron resistencia a cromato, aunque en condiciones especÃficas de especie receptora, tipo de vector y medio de cultivo. Con estos resultados, suman cuatro las subfamilias (LCHR1, LCHR2, LCHR5 y LCHR6) en las que se han reportado miembros funcionales.
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